液相色譜儀只要求樣品能制成溶液,不受樣品揮發(fā)性的限制,流動相可選擇的范圍寬,固定相的種類繁多,因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質。
液相色譜儀在條件:流動相、固定相、溫度和壓力等一定時,樣品濃度很低時Cs、Cm很小時,K只取決于組分的性質,而與濃度無關。這只是理想狀態(tài)下的色譜條件,在這種條件下,得到的色譜峰為正常峰;在許多情況下,隨著濃度的增加,K減小,這時色譜峰為拖尾峰;而有時隨著溶質濃度增加,K也增加,這時色譜峰為前延峰。因此,只有盡可能減少進樣量,使組分在柱內濃度降低,K恒定時,才能獲得正常峰。
而出現(xiàn)峰展寬的時候就要注意了,可能是以下原因:
1、流動相粘度過高
2、色譜柱污染或失效,柱效太低
3、進樣體積過大
4、呈現(xiàn)兩個或多個未被*分離的峰
5、保留時間過長
6、柱溫過低
7、樣品超載
8、保護柱污染或失效
9、柱外體積過大
10、緩沖液溶度太低
解決方法也很簡單:
1、清洗或更換色譜柱
2、減小進樣體積
3、等度洗脫時增加強溶劑濃度,或采用梯度洗脫
4、選擇其他色譜柱改善分離效果
5、稀釋樣品,或采用小體積進樣
6、檢查各接頭處的連接,避免死體積形成
7、增加濃度
8、適當提高柱溫
9、更換保護柱
10、增加柱溫,采用低粘度流動相